МУ Некробактериоз и копытная гниль

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВО РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
13 EMBED Imaging. 1415
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ
УНИВЕРСИТЕТ»








Кафедра инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы








С2.Б.11 ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ И МИКОЛОГИЯ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ


ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА.
ВОЗБУДИТЕЛИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА И КОПЫТНОЙ ГНИЛИ.


Специальность 111801 Ветеринария














Уфа 2013
УДК637.12.04/.07:378.147
ББК 36.95+74.58
А 65

Рекомендовано к изданию методической комиссией факультета биотехнологий и ветеринарной медицины (протокол № 2 от « 04 » сентября 2013 г.)






Составитель: профессор, д-р биол. наук А. В. Андреева
доцент, канд. биол. наук З. З. Ильясова

Рецензент: заведующий кафедрой морфологии, патологии, фармации и
незаразных болезней, д-р ветеринар. наук Гимранов В.В.

Ответственный за выпуск:
зав. кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, д-р биол. наук, профессор Андреева А.В.





















г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,
зоогигиены и ветсанэкспертизы

Лабораторная работа.
Возбудители некробактериоза и копытной гнили.

Цель занятия Изучить морфологию, культуральные, тинкториальные, ферментативные свойства возбудителей некробактериоза и копытной гнили, а также лабораторную диагностику и средства специфической профилактики данных заболеваний.
Общие сведения
НЕКРОБАКТЕРИОЗ (фузариобактериоз) - хроническое, антропозоонозное заболевание, характеризующееся поражением ткани конечностей, гнойно-некротическими поражениями кожи, слизистых оболочек, иногда и паренхиматозных органов (генерализованный процесс). Человек заболевает редко (абсцессы на коже рук, в полости рта, легких).
Устойчивость. В фекалиях сохраняется до 50 дней, в моче до 15 суток, в молоке до 40 суток. В почве: летом до 10-15 суток, зимой - до 2 месяцев. При тем-ре 70°С сохраняют жизнеспособность до 10 мин. При кипячение погибают моментально. Чувствителен к растворам едкого натра, креалина, лизола, фенола, формальдегида, перманганата калия. Чувствителен к антибиотикам тетрациклинового ряда. Не чувствителен к стрептомицину и к пенициллину.
Патогенность. Болеют все виды сельскохозяйственных животных, собаки, кошки, гуси, куры, дикие животные. Восприимчив и человек.
Наиболее часто у животных поражаются конечности. Это послераневая инфекция. Возбудитель интенсивно размножается в травмированной ткани, токсины его нарушают порозность сосудов - ткани недостаточно снабжаются кровью (кислородом) - создаются анаэробные условия, что способствует еще более интенсивному размножению возбудителя и проникновению в более глубокие ткани. Возбудитель, попадая в кровь, способствует септицемии и поражает внутренние органы (некротические очаги в печени, селезенке, сердечной мышце).
У собак вызывает образование абсцессов и флегмон на коже. У кур отмечаются некротические очаги в глотке, гортани, языке, пищеводе и во внутренних органах.
Морфология. Возбудитель некробактеиоза Fusobacterium necrophorum (род Fusarium) выделен Р. Кохом в 1881г.
В свежих культурах имеет форму палочек средних размеров (2-5 мкм), но чаще расположены в виде переплетающихся нитей, со вздутиями, которые достигают до 350-400 мкм.
В старых культурах и из хронических очагов имеет форму коротких кокковидных палочек, окрашивается неравномерно зернисто, биполярно (по концам). Гр.(-), спор и капсул не образует. Красится по Муромцеву, Романовскому-Гимзе, фуксином Циля, синькой Лёффлера.
Материал для исследования. В лабораторию посылают кусочки пораженной ткани - ее берут на границе некротизированной и здоровой, трупы птиц и мелких животных, слюну, мазки. Материал должен быть свежим или консервирован в 30 % глицерине.
Культуральные свойства. Строгий анаэроб. Оптимальная температура роста 34...37°С. На средах Китта-Тароцци - особенно хорошо растет при добавлении 10-20 % бычьей сыворотки и 0,5-1,0 % глюкозы. Отличается помутнением, затем выпадением осадка и просветления среды. Оптимальная рН среды 7,4-7,6.
На глюкозно-кровяном агаре - в строгих анаэробных условиях образует мелкие, круглые или овальные колонии в виде росинок со слабой зоной зеленоватого гемолиза (альфа-гемолиз).
На мозговой среде с сернокилым железом вызывает почернение среды (образует Н2 S).
Биохимические свойства. Ферментирует с образованием кислоты и небольшого количества газа: глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, салицин, левулезу. Не образует сероводород, индол, аммиак.
Лабораторная диагностика.
1) Бактериоскопия (окраска по Граму, по Муромцеву, по Романовскому - Гимзе синькой Лёффлера), зернистоокрашенные нити или тонкие Гр.(-) палочки.
2) Посев на питательных средах (Китта - Тароцци, глюкозо кровавый агар).
3) Биопроба (белые мыши, кролики). Кроликов заражают аппликацией патологического материала в подкожный отпрепарированный «кармашек» в области уха или инъецируют подкожно сбоку, мышей в области корня хвоста через несколько дней на месте заражения развивается некротический очаг, который распространяется на соседние ткани и при вскрытии обмечают очаги некроза и во внутренних органах. После гибели лабораторных животных (кролики - через 1...2 мес, мыши - через 8... 14 сут.), их вскрывают и из пораженных внутренних органов производят посевы на питательные среды, готовят мазки-отпечатки из пораженного очага.
4) Иммунофлуоресцентный метод. Для ускоренной индикации возбудителя в патологическом материале и при исследовании крови применяют МФА. Для окрашивания используют конъюгаты из моносывороток групп А, В, С, Д и др.
5) Для выявления атипичных форм некробактериоза разработана РСК с антигеном - экстрактом 3-дневной культуры F. necrophorum в печеночном бульоне. Титр антигена 1:40.
Биопрепараты. Предложены методы химиотерапии (сульфаниламидные препараты, а/б тетрациклинового ряда); некрофар. Вакцина против некробактериоза животных инактивированная.
Иммунитет после переболевания не наступает. Животные могут повторно заразиться некробактериозом.



КОПЫТНАЯ ГНИЛЬ - инфекционная, хроническая болезнь овец, ягнят старше 3-4 мес (после отъема), характеризующаяся мацерацией и воспалением кожи межкопытной щели и венчика, отслоением и гнилостным распадом копытного рога подошвы, проявляющаяся хромотой с периодами обострения. Встречается и у телят.
Устойчивость. Возбудитель мало устойчив к факторам внешней среды. В пастбищных условиях он сохраняется не более двух недель. Температура 90°С убивает его за 1 мин, 80°С - за 2 мин., растворы креолина, формалина, фенола, гидроокись натрия - в течение 15-20 мин. В пораженном копытном роге он сохраняется до трех лет. У переболевших животных возбудитель сохраняется в пораженных тканях до 3-4 лет.
Морфология. Возбудитель впервые выделил Беверидж (1941) - анаэробный микроорганизм Bacterioides nodosus (Fusiformis nodosus), относящийся к семейству Bacteroidaceace роду Bacteroides - представляет собой, крупную (6-8 х 0,6-1 мкм), прямую или слегка изогнутую палочку, концы которой утолщены и окрашиваются интенсивно, что делает ее похожей на гантели. Спор и капсул не образует, неподвижна, по Граму не окрашивается. Часто возбудитель бывает окружен мелкими грамотрицательными палочками (феномен Бевериджа). При окраске метиленовой синью обнаруживаются зерна красного цвета вдоль палочки и на ее концах.
Материал для исследования. Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют:
мазки-отпечатки из свежепораженной тканей;
мазки из слизи и слизь, покрывающую кожу межкопытной щели;
кусочки тканей, отобранные на границе здоровых и пораженных участков;
пораженные копыта от вынужденно убитых животных.
Отбор материала необходимо проводить от не леченых животных.
Материал помещают в стерильную посуду или полиэтиленовый пакет и с соблюдением мер, предотвращающих распространению инфекции, доставляют в термосе со льдом в ветлабораторию не позднее 24 ч после его отбора.
Культуральные свойства. В. nodosus - облигатный анаэроб. Он весьма требователен к составу питательных сред; его удается культивировать на полужидкой среде Китта-Тароцци и жидкой питательной среде из экстракта головного мозга с добавлением 2-5 % триптического перевара порошка копытного рога (на этих средах микробы растут в виде тяжей, на дне пробирки образуют осадок; газообразование отсутствует или слабое). Величина и форма колоний зависят от состава плотных питательных сред: на лактоальбуминовом агаре вырастают плоские блестящие шероховатые колонии диаметром до 1 мм, вдавленные в среду; на тиаминцистеиновой среде - выпуклые блестящие колонии с ровными краями.
Лабораторная диагностика. Диагноз ставят с учетом лабораторных исследований. Для бактериоскопии готовят мазки-отпечатки из свежепораженных участков, которые окрашивают по Граму и мик-роскопируют. Обнаружение в поле зрения 20 и более палочек В.nodosus позволяет поставить предварительный диагноз. Для получения первичной культуры возбудителя рекомендуется использовать бульон Вейберга в модификации Коваленко с добавлением 2 % порошка рога (копытного) овец, 0,01 % цистеина.
Биопробу ставят на здоровых овцах. Из различных участков больных копытцев собирают свежепораженные ткани и слизь, которые в нативном состоянии или в виде эмульсии 1:5-1:10 на стерильном физрастворе втирают подопытным овцам (ягнятам) в скарифицированную кожу межпальцевых щелей двух конечностей. Через 4-6 (в положительном случае) дней обнаруживают первые признаки заболевания (одновременное отторжение рогового и производящего слоев эпидермиса вместе с основной мембраной от основы кожи межпальцевой щели). Возбудитель не патогенен для лабораторных животных и куриных эмбрионов.
Иммунитет. Изучен недостаточно. В сыворотке кроен больных и вакцинированных животных проявляются агглютинины к О- и К- антигенам возбудителя, а также комплементсвязывающие антитела.
Для серодиагностики предложена РСК, чувствительность которой составляет около 80 %.
Идентификацию возбудителя в патологическом материале проводят также непрямым методом иммунофлуоресценции, а в культуре только непрямым методом иммунофлуоресценции.
Биопрепараты. Ванны с 10 %-ными растворами медного купороса, сульфата цинка, формалина (применяют в течение месяца); задают сульфат цинка внутрь - 0,75 г/гол; антибиотики пролонгированного действия: бицилин-3, дибиомицин и др. Для активной иммунизации применяют инакти вированные вакцины.
1.4 Задания.
1) провести микроскопию предложенных мазков возбудителей,
2) зарисовать микроскопическую картину.

Вопросы для самоконтроля знаний.
1.Какие среды используют для культивирования возбудителя некробактериоза?
2.Каковы морфологические особенности возбудителя некробактериоза?
3.Как ставят биопробу при диагностике копытной гнили?
4.Как ставят РИФ при диагностике копытной гнили?
5.Какие морфологические различия между возбудителями некробактериоза и копытной гнили?


Библиографический список

Асонов, Н. Р. Микробиология [Текст] : учеб. для студ. Вузов по спец. 310700 «Зоотехния» / Н. Р. Асонов. – 4-е изд., перераб. И доп. – М.: Колос, 2001.
Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст] : учеб. для студ. вузов по спец. «Ветеринария» / Н. А. Радчук, Г. В. Дунаев, Н. М. Колычев [и др.] ; под ред. Н. А. Радчука. – М. : Агропромиздат, 1991.
Кисленко, В. Н. Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст]: учебник для студ. Вузов, обуч. По спец. 111201 «Ветеринария» / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев. – М. : КолосС, 2006 – 2007.Ч .1Общая микробиология
Кисленко, В. Н. Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст]: учебник для студ. Вузов, обуч. По спец. 111201 «Ветеринария» / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев ; Международная ассоциация «Агрообразование». – М. : КолосС, 2006 – 2007.Ч.3 Частная микробиология
Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии [Текст] : учеб. для студ. вузов по спец. «Ветеринария» / Р.Г.Госманов, Н.М. Колычев, А.А. Барсков. – Омск: Изд-во ОМГАУ, 2008. – 309 с.
Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии [Текст] : учеб. для студ. вузов по спец. «Ветеринария» / В.Н. /В.Н.Кисленко. – М.: КолосС, 2005. – 230 с.
Руководство по микробиологии и иммунологии [Текст]: учеб. пособие для студ. Вузов, обучающихся по спец. «Ветеринария», «Ветеринарно-санитарная экспертиза» : допущено МСХ / [Н. М. Колычев и др.] ; под. Общ. Ред. Н. М. Колычева, В. Н. Кисленко. - Новосибирск: Арта, 2010. - 254 с.








13 PAGE \* MERGEFORMAT 14215




Root Entry

Приложенные файлы

  • doc 16377
    Размер файла: 174 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий