[MedBooks-Медкниги]Лысак В.В., Блажевич О.В. Важнейшие группы микроорганизмов

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра микробиологии






Важнейшие группы
микроорганизмов

Методические указания



Для студентов специализации
Н.04.01.06 «Микробиология»


















МИНСК
2000 УДК 576.8(075.5)
ББК 28.4р
В13


А в т о р ы - с о с т а в и т е л и:
В. В. Лысак, О. В. Блажевич


Рецензент: кандидат биологических наук,
доцент Е. В. Доброжинецкая

Рекомендовано
Ученым советом биологического факультета БГУ
30 ноября 2000 г., протокол № 3












Важнейшие группы микроорганизмов: Метод. указания/
В13 Сост. В. В. Лысак, О. В. Блажевич. Мн.: БГУ, 2000. 30 с.

В данном издании приведены методические указания и программы к разделу дисциплин «Важнейшие группы микроорганизмов». Предназначено для студентов специализации «Микробиология» биологического фа-культета.

УДК 576.8(075.5)
ББК 28.4р

© БГУ, 2000

Все известные микроорганизмы делятся на две большие группы – прокариотические и эукариотические микроорганизмы. К прокариотическим микроорганизмам относятся бактерии, к эукариотическим микроорганизмам – простейшие, микроскопические водоросли, слизевики, микроскопические грибы.
Прокариотические микроорганизмы отличаются от эукари-отических по целому ряду признаков и, в первую очередь, по строению клетки, таблица.
Кроме строения клеток прокариотические микроорганизмы отличаются от эукариотических по следующим свойствам:
Форма и размеры клеток. Прокариотические микроорганизмы – одиночные клетки или простые ассоциации сходных клеток, имеющих, за редким исключением, сферическую, цилиндрическую или изогнутую форму и средние размеры 0,2-10,0 мкм. Эукариотические микроорганизмы имеют диаметр клетки до 40 мкм и являются одноклеточными, нитчатыми или истинно многоклеточными организмами.
Размножение. Прокариотические микроорганизмы, как правило, размножаются бинарным делением, в то время, как для эукариотических микроорганизмов характерны различные формы бесполого и полового размножения.
Дыхание и фотосинтез. Процессы дыхания и фотосинтеза и связанные с ними пигменты и ферменты у тех представителей прокариот, которые обладают этими физиологическими функциями, связаны с цитоплазматической мембраной или ее производными. У эукариотических микроорганизмов аэробное дыхание происходит в митохондриях, а фотосинтез в хлоропластах, содержащих специальные мембраны, организованные в ламеллы или граны. Кроме того, большая группа прокариотических микроорганизмов способна жить без доступа молекулярного кислорода (в анаэробных условиях) и получать энергию в процессе анаэробного дыхания или брожения.
Источник энергии. Некоторые прокариотические микроорганизмы (хемолитотрофы) могут получать энергию путем окисления различных неорганических соединений в процессе аэробного дыхания, что не характерно для эукариотических микроорганизмов.
Фиксация молекулярного азота. Некоторые прокариоты обладают этой способностью, в то время, как ни один эукариотический организм не способен фиксировать молекулярный азот.

Таблица
Различия в строении клеток прокариотических
и эукариотических микроорганизмов
Признак
Прокариотическая клетка
Эукариотическая клетка

Организация генетического материала
Нуклеоид, состоящий ча-ще всего из одной зам-кнутой в кольцо или ли-нейной хромосомы, рас-положен непосредствен-но в цитоплазме. Имею-тся гистоноподобные белки. Гены не несут ин-тронов (за исключением архебактерий). Гены ор-ганизованы в опероны.
Ядро, содержащее обычно более одной хромосомы, окружено двухслойной ядерной мембраной. Есть белки гистоны. Гены имеют экзонно-ин-тронную организацию. Опероны отсутствуют.

Локализация ДНК
В нуклеоиде и плазмидах
В ядре и некоторых органеллах (митохон-дриях, хлоропластах)

Цитоплазматические органеллы
Отсутствуют (кроме ри-босом)
Имеются

Рибосомы в цитоплазме
70 S-типа
80 S-типа

Движение цитоплазмы
Отсутствует
Часто обнаруживается

Жгутики
Состоят из одной фибриллы
Состоят из микротру-бочек, собранных в группы

Компартментали-зация клеток
Слабо выражена
Клетка разделена мембранами на отдельные отсеки

Клеточная стенка
Содержит пептидогликан муреин (за исключением архебактерий)
Пептидогликан муреин отсутствует

Раздел дисциплин специализации «Важнейшие группы микроорганизмов» включает два спецкурса «Важнейшие группы прокариотических микроорганизмов» и «Важнейшие группы эукариотических микроорганизмов». В методических указаниях приведены лабораторные задания, программы и рекомендуемая литература по данным спецкурсам.



СПЕЦКУРС
“Важнейшие группы прокариотических
микроорганизмов”

Задача 1
Бактерии семейства Enterobacteriaceae

1 занятие.
Цель занятия: выявление особенностей морфологии клеток бактерий семейства Enterobacteriaceae, а также особенностей их роста на различных дифференциальных средах.
Штаммы: в работе используют бактерии Erwinia herbicola, Erwinia carotovora, Escherichia coli, Proteus vulgaris.
Среды для культивирования бактерий: среда Эндо, среда Левина, среда Клиглера, среда Плоскирева, дифференциально-диагностические среды малого пестрого ряда Гисса.
Красители и реактивы: 0,5% карболовый раствор генцианового фиолетового, раствор Люголя, 1% водный раствор фуксина, 96о этиловый спирт, 3% водный раствор КОН.
Оборудование: бактериологическая петля, предметные стекла, спиртовка, световой биологический микроскоп Биолам.

Задание на занятие:
1) окраска бактерий по методу Грама и определение типа клеточной стенки с использованием раствора КОН;.
2) посев уколом в дифференциально-диагностические среды малого пестрого ряда Гисса;
3) посев методом истощающего штриха на элективные среды Эндо, Левина, Клиглера, Плоскирева;
4) оформление таблицы “Особенности морфологии клеток бактерий семейства Enterobacteriaceae” (форма клеток, сочетание клеток, результат окрашивания по методу Грама, тип клеточной стенки).

Ход работы:
I. Окраска бактерий по методу Грама
Техника. 1. Фиксированный мазок покрывают кусочком фильтровальной бумаги и на него наносят карболовый раствор генцианового фиолетового. Окрашивание производят в течение 1-2 мин.
2. Бумажку снимают, краситель сливают и, не промывая мазок водой, обрабатывают его в течение 1-2 мин раствором Люголя до почернения.
3. Сливают раствор Люголя, окрашенный мазок обесцвечивают 96о этиловым спиртом (препарат погружают несколько раз в стаканчик со спиртом до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя с мазка).
4. Препарат промывают водой.
5. Мазок дополнительно окрашивают в течение 1-2 мин водным раствором фуксина.
6. Краситель сливают, препарат промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют с иммерсионной системой.
В результате грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в розовый

II. Определение типа клеточной стенки с помощью КОН
Техника. На предметное стекло наносят каплю 3%-ного водного раствора КОН. Петлей вносят культуру исследуемых бактерий и тщательно эмульгируют. Если суспензия тянется за петлей, это - грамотрицательные бактерии, если нет – грамположительные бактерии.

III. Определение способности энтеробактерий
использовать углеводы и спирты на средах Гисса
Техника. С помощью бактериологической петли бактерии засевают уколом в жидкие и полужидкие среды Гисса в пробирках. Рост бактерий в жидкой среде регистрируют по помутнению среды, образованию пленки или осадка. В полужидкой среде отмечают наличие роста в месте посева уколом или на поверхности среды. Образование газа регистрируют по появлению на поверхности среды пены, появлению пузырьков или разрывов в толще среды или вытеснению среды из поплавка (в жидких средах); а образование органических кислот – по изменению окрашивания среды, являющегося следствием изменения ее рН, по сравнению с контрольной (фоновой) средой.

IV. Посев методом истощающего штриха на элективные среды
Техника. Исследуемую бактериальную культуру с помощью бактериологической петли высевают параллельными штрихами (А) на поверхность агаризованной питательной среды в чашках Петри. После этого петлю прожигают в пламени спиртовки, охлаждают и проводят еще несколько параллельных штрихов (Б), перпендикулярных штрихам А. Затем петлю снова стерилизуют и наносят новую серию параллельных штрихов (В), перпендикулярных штрихам Б. После очередной стерилизации наносится еще одна серия штрихов (Г), перпендикулярных предыдущей.
В результате рассева на агаризованных средах формируются изолированные колонии, пригодные для исследования их морфологии.


2 занятие
Цель занятия: изучение факторов патогенности у бактерий рода Erwinia.
Штаммы: в работе используют бактерии рода Erwinia (Erw. herbicola, Erw. carotovora, Erw. atroseptica, Erw. сhrysanthemi).
Cреды и реактивы: полноценная питательная агаризованная среда (ППА), содержащая ионы Са2+ (3 мл одномолярного раствора CaCl2 на 100 мл среды), с 1% полипектатным гелем (4 мл 1%-ного раствора полипектата натрия наслаивают на поверхность затвердевшей агаризованной среды); минимальная глюкозо-солевая среда, содержащая 0,2% растворимой целлюлозы; минимальная глюкозо-солевая среда, содержащая обезжиренное молоко; мясо-пептонный желатин.
Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, стереоскопический бинокулярный микроскоп.

Задание на занятие:
учет результатов 1-го занятия:
а) определение формы и окраски бактериальных колоний, выросших на различных элективных средах,
б) выявление образования кислоты и газа на дифференциально-диагностических средах малого пестрого ряда Гисса,
в) оформление таблицы “Особенности роста бактерий семейства Enterobacteriaceae на различных элективных средах”;
2) выявление у исследуемых бактерий рода Erwinia целлюлолитической, протеолитической и пектолитической активности.

Ход работы:
Определение протеолитической активности
Разжижение желатина. Техника. С помощью бактериологической петли исследуемую бактериальную культуру засевают уколом в питательный мясо-пептонный желатин. Культивируют при комнатной температуре. Разжижение желатина регистрируют визуально, учитывая интенсивность и характер разжижения.
Определение протеолитической активности на среде с обезжиренным молоком. Техника. Определение проводят на минимальной глюкозо-солевой среде, содержащей в качестве субстрата обезжиренное молоко. Культуру бактерий засевают «медальонами». Продукцию ферментов регистрируют по образованию светлых зон вокруг сформировавшихся «медальонов» исследуемых бактерий после 48 часов инкубирования.

II. Определение целлюлолитической активности
Техника. Исследуемые бактериальные культуры засевают «медальонами» на поверхность минимальной глюкозо-солевой среды, содержащей 0,2% растворимой целлюлозы. После 48 часов инкубирования при 28оС чашки Петри со средой заливают 3-4 мл 0,1% раствора Конго красного и выдерживают около 30 мин. После этого краситель сливают, а среду промывают 8% раствором NaCl. Наличие светлых неокрашенных пятен в месте роста и вокруг “медальонов” бактерий свидетельствует о продукции ими целлюлолитических ферментов.

III. Определение пектолитической активности
Техника. Исследуемые бактериальные культуры засевают «медальонами» на поверхность полноценной питательной агаризованной среды, содержащей ионы Са2+, с нанесенным на нее полипектатным гелем. После инкубирования в течение 24 часов при 28оС продукцию пектолитических ферментов регистрируют по образованию лунок на поверхности полипектатного геля.


Задача 2
Факультативные анаэробные спорообразующие бактерии рода Bacillus

1 занятие
Цель занятия: определение особенностей морфологии клеток и колоний бактерий рода Bacillus, выявление эндоспор у исследуемых бактерий.
Штаммы: в работе используют бактерии рода Bacillus (B.subtilis, B.cereus , B.megaterium, B.brevis, B.mycoides, B.polymyxa).
Среды: полноценная питательная агаризованная среда.
Красители и реактивы: 0,5% карболовый раствор генцианового фиолетового, раствор Люголя, 1% водный раствор фуксина, 96о этиловый спирт, 5% раствор малахитового зеленого, 0,5% раствор сафранина, 0,1% раствор Конго красного, 8% раствор NaCl.
Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные стекла, световой биологический микроскоп Биолам.

Задание на занятие:
учет результатов по выявлению продукции пектолитических, протеолитических и целлюлолитических ферментов у бактерий рода Erwinia;
2) выявление эндоспор у бактерий рода Bacillus по методу Шефера-Фултона;
3) окраска бактерий рода Bacillus по методу Грама;
4) рассев бактерий рода Bacillus методом истощающего штриха на ППА;
5) оформление таблицы “Особенности морфологии клеток бактерий разных видов рода Bacillus” (форма клеток, сочетание клеток, наличие эндоспор, результат окрашивания по методу Грама).
Ход работы:
Окраска эндоспор по методу Шефера-Фултона
Техника. 1. Фиксированный мазок покрывают кусочком фильтровальной бумаги, на него наносят 5-6 капель раствора малахитового зеленого и нагревают 2-3 раза до появления паров, держа стекло над пламенем спиртовки.
2. Бумажку снимают, препарат промывают водой и в течение 30 сек докрашивают раствором сафранина.
3. Препарат промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют, пользуясь иммерсионной системой.
В результате споры окрашиваются в зеленый цвет, а клетка - в красный.

II. Окраска бактерий по методу Грама
Техника окраски приведена выше.

III. Посев бактерий методом истощающего штриха
с целью получения изолированных колоний
Техника посева приведена выше.


2 занятие
Цель занятия: изучение морфологии колоний, формируемых разными видами Bacillus на ППА.
Штаммы: в работе используют бактерии рода Bacillus (B.subtilis, B.cereus , B.megaterium, B.brevis, B.mycoides, B.polymyxa).
Оборудование: стереоскопический бинокулярный микроскоп.

Задание на занятие:
1) визуальная и стереомикроскопическая оценка морфологии выросших на ППА колоний бактерий рода Bacillus;
2) оформление таблицы “Особенности морфологии колоний, сформированных на ППА разными видами бактерий рода Bacillus”.

Ход работы:
Оценить визуально и описать морфологию колоний бактерий рода Bacillus, выращенных на ППА. Выявить существующие видовые отличия характера формирования колоний на агаризованной среде. На основании результатов визуального контроля оформить таблицу.
Задача 3
Актиномицеты

1 занятие
Цель занятия: выявление особенностей роста и спорообразования актиномицетов на агаризованных питательных средах.
Штаммы: в работе используют представителей родов Actinomyces, Streptomyces, Nocardia, Rhodococcus.
Среды и красители: полноценная питательная агаризованная среда (ППА), крахмало-аммиачный агар, среда Чапека, дистиллированная вода или 1% водный раствор метиленового синего.
Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные и покровные стекла, стереоскопический бинокулярный микроскоп, световой биологический микроскоп Биолам.

Задание на занятие:
1) изучение характера роста актиномицетов и образования ими мицелия на различных агаризованных средах и выявление существующих отличий;
2) исследование формы спор и спороносцев у исследуемых бактерий методом “отпечатков”;
3) оформление таблицы “Особенности роста и спорообразования актиномицетов на агаризованных средах”.

Ход работы:
I. Рост актиномицетов на средах различного состава
Определить различия характера роста и формирования мицелия на агаризованных средах различного состава. Выявить наличие «атипичного роста» на ППА. Определить плотность и консистенцию колоний в зависимости от питательной среды.

II. Определение типа мицелия
Определить тип мицелия, который может быть стабильным или распадающимся. Если мицелий распадается, отметить форму фрагментов. Установить, образуется ли и субстратный и воздушный мицелий, либо только субстратный или только воздушный. Определить характер расположения конидий: одиночные конидии, пары конидий, короткие цепочки конидий, длинные цепочки конидий.

III. Изучение формы спор и спороносцев
методом “отпечатков”
Техника. Чистое покровное стекло прикладывают к выросшей на агаризованной среде культуре актиномицетов , слегка придавливают бактериологической петлей или пинцетом, снимают и помещают отпечатком вниз в каплю воды или метиленового синего на предметное стекло. Микроскопируют с иммерсионной системой.







Программа спецкурса «Важнейшие группы прокариотических микроорганизмов»

КЛАССИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ
Филогенетическая и искусственная классификация. Нумерическая таксономия. Методы молекулярной биологии, используемые в систематике бактерий: определение нуклеотидного состава ДНК, метод молекулярной гибридизации ДНК - ДНК, метод молекулярной гибридизации РНК - ДНК, метод биологической гибридизации, метод изучения нуклеотидной последовательности рРНК. Классификация бактерий по девятому изданию определителя Берджи.

ОТДЕЛ GRACILICUTES
Характеристика отдела
Классы Anoxyphotobacteria и Oxyphotobacteria
Фототрофные бактерии. Основные свойства фототрофных бактерий. Систематика. Практическое значение. Оксигенный фотосинтез у цианобактерий и прохлорофит. Аноксигенный фотосинтез у зелёных и пурпурных бактерий. Фотореакции у пурпурных и зеленых бактерий. Пути фиксации углекислого газа фотосинтезирующими прокариотическими организмами. Пурпурные бактерии, их характеристика, систематика и распространение в природе. Зеленые бактерии, их характеристика, систематика и распространение в природе.
Цианобактерии: характеристика биологических свойств и физиологические особенности. Прохлорофиты. Галобактерии. Экстремальные галофильные бактерии. Бесхлорофильный фотосинтез у галобактерий.

Класс Scotobacteria
Хемолитотрофные бактерии. Основные группы хемолитотрофных бактерий. Распространение и роль в природе. Нитрифицирующие бактерии, их характеристика. Процесс нитрификации и его роль в круговороте веществ в природе. Характеристика бесцветных серобактерий, их распространение в природе. Железобактерии, их характеристика. Механизм окисления железа. Водородные и карбоксидобактерии, их характеристика и распространение в природе.

Семейство Pseudomonadaceae. Систематика. Основные свойства представителей семейства. Род Pseudomonas. Систематика. Биохимические особенности рода Pseudomonas. Практическое значение. Бактерии рода Pseudomonas - продуценты пигментов и антибиотических веществ.

Семейство Enterobacteriaceae. Систематика. Основные свойства представителей семейства. Распространение в природе. Брожение смешанного типа. Характеристика представителей рода Escherichia. Бактерии E.coli - объекты интенсивного лабораторного исследования. Характеристика бактерий родов Shigella, Salmonella, Klebsiella, Citrobacter, Proteus, Serratia, Hafnia, Edwardsiella, Yersinia, Morganella, Providencia. Бактерии рода Erwinia, их характеристика и народнохозяйственное значение.

Семейство Rickettsiaceae. Систематика, характеристика, распространение в природе. Риккетсии, вызывающие заболевания у человека.

Семейство Spirochaetaceae. Систематика, характеристика, распространение в природе.

Азотфиксириющие бактерии. Характеристика представителей семейств Azotobacteriaceae и Rhizobiaceae. Систематика семейств. Практическое значение азотфиксирующих бактерий. Химизм фиксации молекулярного азота.

ОТДЕЛ FIRMICUTES
Характеристика отдела
Класс Firmibacteria
Семейство Bacillaceae. Систематика. Характеристика одноклеточных спорообразующих бактерий. Распространение в природе. Практическое значение.

Молочнокислые бактерии. Молочнокислое брожение. Характеристика молочнокислых бактерий, распространение в природе, практическое значение. Патогенные представители данной группы бактерий.

Класс Thallobacteria
Коринеформные бактерии, их систематика и характеристика. Распространение в природе и практическое значение.

Семейство Propionibacteriaceae. Систематика. Биохимические особенности. Пропионовокислое брожение. Практическое значение.

Актиномицеты, их систематика, характеристика биологических свойств. Распространение в природе и практическое значение.

ОТДЕЛ TENERICUTES
Характеристика отдела
Класс Mollicutes
Микоплазмы, их систематика и биологические свойства. Факторы вирулентности фитопатогенных микоплазм и микоплазм патогенных для человека и животных. Распространение в природе. Практическое значение.

ОТДЕЛ MENDOSICUTES
Характеристика отдела
Класс Archaebacteria
Архебактерии, их отличие от эубактерий. Характеристика основных физиологических групп архебактерий.

Метилотрофные бактерии
Общая характеристика метилотрофных бактерий. Распространение в природе. Систематика и основные свойства облигатных метилотрофных бактерий. Систематика и основные свойства факультативных метилотрофных бактерий. Ассимиляция одноуглеродных соединений метилотрофными бактериями по рибулозомонофосфатному, рибулозобифосфатному и сериновому путям.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология.- М.: Изд-во МГУ, 1992.- С.135-159, 225-292, 328-364.
2. Жизнь растений. - М.: Просвещение, 1974. - T.I. - С.200-313.
3. Киселева Б.С. Энтеробактерии. - М.: Медицина, 1985. - 171 с.
4. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта и соавт.- М.: Мир, 1997. – Т.1. - 432 с. – Т.2. – 368 с.
5. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. - М.: Наука, 1986. - 200 с.
6. Шлегель Г. Общая микробиология. - М.: Мир, 1987. - С.80-116.
7. Пиневич А.В., Худяков И.Я., Мамаева К.А. и др. Функциональная структура цианобактерий / Под ред. Б.В.Громова.- Л.: Изд-во ЛГУ, 1986. - 152 с. (Труды Биол.НИИ ЛГУ N 38).
8. Турова Т.Т. Филогения прокариот на основании анализа аминокислотных и нуклеотидных последовательностей // Успехи микробиологии.- 1983.- N 18. - С.92-112.
9. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Геносистематика бактерий. - М.: Наука, 1976. - 150 с.
10. Дуда В.И. Архебактерии - новое царство живых организмов // Природа. - 1984. - N 2. - С. 13-25.
11. Нестерова А.И., Иванов М.В. Экология метанотрофных бактерий.- 1983. - N 18. - С.3-18.
12. Савельева Н.Д., Заварзин Г.А., Веденина И.Я. Водородные бактерии // Успехи микробиологии. - 1971. - N 7. - С.121-155.
13. Проворов Н.А., Аронштам А.А. Генетика симбиотической азотфиксации у клубеньковых бактерий // Итоги науки и техники. Серия микробиология. - 1991.- Т.23. - С.3-97.
14. Воробьёва Л.И. Пропионовокислые бактерии. – М.: Изд-во МГУ, 1995. – 286 с.

СПЕЦКУРС
“Важнейшие группы эукариотических
микроорганизмов”

Задача 1
Дрожжи

1 занятие
Цель занятия: выявление морфологических особенностей клеток и особенностей роста дрожжевых грибов на плотных и в жидких питательных средах.
Штаммы: в работе используют дрожжевые грибы, относящиеся к родам Saccharomyces, Lipomyces, Rhodotorula, Sporobolomyces, Cryptococcus, Candida, Rhodosporidium.
Среды: сусло-агар, глюкозо-пептонный агар с дрожжевым экстрактом, глюкозо-пептонная жидкая среда с дрожжевым экстрактом, картофельно-глюкозный агар.
Реактивы: тушь.
Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные стекла, пинцет.

Задание на занятие:
1) засев с помощью бактериологической петли исследуемой культурой жидкой глюкозо-пептонной среды с дрожжевым экстрактом;
2) засев штрихом исследуемыми культурами агаризованных сред в чашках Петри;
3) определение образования псевдомицелия или истинного мицелия методом культивирования на стекле и методом пластинок Далмау;
4) выявление наличия капсул у клеток дрожжей и описание их формы и размеров.

Ход работы:
I. Рост дрожжей на различных средах
Рост в жидких средах. При выращивании в жидких средах дрожжи вызывают их помутнение, образуют осадок, кольцо, «островки» пленки или цельную пленку. Рост в виде пленки характеризует способность клеток объединяться в мицелиальные структуры. Пленка может быть тонкой тусклой, иногда сморщенной и всползающей на стенки пробирки, или блестящей, влажной при длительном культивировании. У дрожжей, образующих истинный мицелий, формируется толстая прочная пленка, которая впоследствии может превращаться в слизистую массу.
Техника. Бактериологической петлей засеять исследуемые культуры дрожжей в пробирки, содержащие жидкую глюкозо-пептонную среду с дрожжевым экстрактом.
Рост на агаризованных средах. Выращенные на агаризованных питательных средах культуры дрожжей по консистенции могут быть пастообразными, маслянистыми, слизистыми, рыхлыми, крошащимися, тянущимися, волокнистыми, кожистыми. Цвет штриха зависит от образования некоторых пигментов, как внутриклеточных, так и выделяющихся в среду культивирования.
Техника. Исследуемые культуры дрожжей высевают прямым штрихом на поверхность сусло-агара и глюкозо-пептонного агара с дрожжевым экстрактом в чашках Петри.

II. Образование истинного и ложного мицелия у дрожжей
Для того, чтобы облегчить процесс распознавания ложного и истинного мицелия, следует обращать внимание на следующее:
граница между клетками истинного мицелия – резко преломляющая свет прямая перегородка; граница между клетками ложного мицелия представлена их изогнутыми концами и не отличается по преломлению света от боковых стенок гиф;
в истинных гифах концевые клетки обычно более длинные, чем предшествующие, а в нитях псевдомицелия – наоборот;
у истинного мицелия нет перетяжек в зоне перегородок, а на псевдомицелии эти перетяжки хорошо заметны.
1. Метод культивирования на стекле
Техника. Расплавленный картофельно-глюкозный агар наливают в чашку Петри и в него, зажав пинцетом, опускают и быстро вынимают стерильные предметные стекла. Покрытые пленкой среды стекла помещают на стеклянную подставку в др
·угой чашке Петри. Посевы делают тонкими штрихами: по три на каждой пластине параллельно короткой стороне стекла или по одному вдоль длинной стороны стекла. Стерильные покровные стекла накладывают на штрихи так, чтобы под ними не было пузырьков воздуха и чтобы часть штриха оставалась свободной. На дно чашки наливают стерильную воду, чтобы избежать пересыхания слоя среды на пластине. Через 6 суток инкубирования при 25оС нижнюю поверхность стекла очищают от среды и микроскопируют. Образование мицелия и псевдомицелия наблюдают в анаэробных (под покровным стеклом) и аэробных (вне стекла) условиях.
Метод пластинок Далмау (в модификации Уикерема).
Техника. В чашки Петри разливают картофельно-глюкозный агар и подсушивают для избавления от конденсата. Затем в верхней части агаровой пластинки наносят длинный штрих негустой дрожжевой суспензии. В нижней части пластинки с двух сторон делают еще два точечных посева. Центральную часть штриха и одну из точек накрывают стерильными покровными стеклами. Через 6 суток инкубирования при 25оС готовые препараты исследуют под микроскопом.

III. Выявление капсул у дрожжей
Техника. Капсулы выявляют на клетках из молодых и старых культур, выращенных на агаризованных средах. Препараты живых клеток (без фиксации) готовят методом негативного контрастирования с помощью черной туши. Для этого петлю с культурой смешивают на предметном стекле с каплей туши и размазывают слегка краем покровного стекла, держа его под углом 45о, а затем накрывают этим стеклом. На черном фоне капсулы видны как светлый ореол вокруг клетки.


2 занятие
Цель занятия: Определение некоторых способов бесполого размножения у дрожжей.
Оборудование: световой биологический микроскоп Биолам, предметные стекла, бактериологическая петля.

Задание на занятие:
1) определение характера роста и пленкообразования при культивировании дрожжей в жидкой среде;
2) описание характера роста исследуемых дрожжей на агаризованных средах с учетом цвета, консистенции, структуры поверхности и формы края или границы роста;
3) выявление наличия капсул клеток исследуемых дрожжевых грибов;
4) определение образования мицелия у изучаемых дрожжей;
5) выявление наличие эндоспор, хламидоспор и баллистоспор у исследуемых культур дрожжей.
6) оформление таблицы «Культуральные и морфологические свойства дрожжей».

Ход работы:
Образование эндоспор, хламидоспор и баллистоспор у дрожжей
Образование эндоспор и хламидоспор.
Эндоспоры – покоящиеся клетки, которые образуются внутри материнской клетки или гифы. Хламидоспоры – толстостенные клетки, образующиеся из вегетативных клеток интеркалярно и терминально на мицелии путем округления отдельных клеток гиф и заполнения их липидным резервным материалом (у некоторых видов образуются без мицелия).
Техника. Образование эндоспор и хламидоспор наблюдают с помощью светового биологического микроскопа в культурах дрожжей, предназначенных для изучения морфологии клеток и образования мицелия и выращенных на картофельно-глюкозном агаре методом культивирования на стекле в течение 3-6 суток (см. выше). Перед микроскопированием нижнюю поверхность предметного стекла освобождают от среды.

Образование баллистоспор.
Баллистоспоры – бесполые споры, образующиеся на заостренных конических выростах клеток (стеригмах), и при созревании отстреливающиеся. Баллистоспоры можно наблюдать по появлению зеркального отражения штриха на крышках чашек Петри, инкубируемых в перевернутом состоянии. Так как образованию и отстреливанию баллистоспор способствует понижение температуры, посевы инкубируют при 18-20оС.
Техника: Исследуемую культуру засевают параллельными или перпендикулярными штрихами на поверхность картофельно-глюкозного агара в чашках Петри, а в крышку наливают сусло-агар, на поверхность которого кладут стерильное предметное стекло, располагая его под одним из штрихов. После появления на сусло-агаре роста дрожжей предметное стекло снимают и наблюдают под микроскопом отстрелившиеся баллистоспоры.

Задача 2
Микроскопические мицелиальные грибы

1 занятие
Цель занятия: определение токсических свойств микроскопических мицелиальных грибов.
Штаммы: в работе используют мицелиальные грибы, относящиеся к родам Penicillium, Aspergillus, Trichoderma, Fusarium, Alternaria. В качестве тест-объектов используют Paramecium caudatum (простейшие), Saccharomyces vini (дрожжи), Bacillus subtilis (бактерии).
Среды: жидкая среда Чапека, ППА, полноценная питательная жидкая среда (ППЖ).
Оборудование: микробиологический шпатель, бактериологическая петля, диски фильтровальной бумаги, микропипетки, колбы Эрленмейера, чашки Петри, предметные стекла, световой биологический микроскоп Биолам.

Задание на занятие:
определение токсических свойств грибов на простейших;
определение токсических свойств грибов на бактериях и дрожжах;
поверхностное культивирование грибов в жидкой среде.

Ход работы:
I. Определение токсических свойств грибов
Методы применяются для первичного определения токсичности культуральной жидкости грибов. В работе используют культуральную жидкость гриба после фильтрации, полученную в результате культивирования исследуемого гриба поверхностным способом в жидкой питательной среде в течение определенного времени (для Trichoderma, Fusarium – 10-25 суток, для Penicillium, Aspergillus - 10-15 суток, для Alternaria - 15-20 суток).
Определение токсичности на простейших
Критерием для определения токсичности служит время гибели парамеций от исследуемой культуральной жидкости, которую констатируют по полному прекращению их движения и распаду. При действии культуральной жидкости резко токсичных грибов гибель парамеций наступает через 3 минуты, токсичных – 8-20 минут, слабо токсичных – через 2 часа. Нетоксичные штаммы грибов не вызывают гибели или каких-либо морфологических изменений парамеций.
Техника. На предметное стекло микропипеткой наносят 2 капли культуральной жидкости гриба и 1 каплю чистой культуры Paramecium caudatum. Все три капли должны быть одинакового объема. Предметное стекло помещают в чашку Петри с фильтровальной бумагой, смоченной водой (влажная камера). Наблюдение за поведением парамеций осуществляют с помощью светового микроскопа каждые 5-10 минут и начинают через несколько минут после начала опыта.
Определение токсичности на чувствительных микроорганизмах
Качественный метод определения наличия микотоксинов в культуральной жидкости гриба основан на образовании зон ингибирования роста чувствительных культур. Определение проводят чашечным методом с помощью бумажных дисков.
Техника. 0,1 мл суточной жидкой культуры чувствительных тест-объектов (Saccharomyces vini или Bacillus subtilis) высевают на поверхность ППА в чашках Петри. Затем 0,01 мл культуральной жидкости гриба наносят на бумажные диски, расположенные на агаризованной среде с газоном тест-культуры. Чашки с испытуемыми культурами выдерживают в термостате в течение 24-48 часов при температуре, оптимальной для роста тест-микроорганизма, после чего выявляют наличие и диаметр зон задержки роста тест-культуры вокруг бумажного диска. Отсутствие зоны задержки роста свидетельствует об отсутствии токсина в испытуемом образце.

II. Поверхностное культивирование грибов в жидких средах
Данный способ культивирования используют для накопления токсических веществ микроскопических грибов в питательной среде с целью дальнейшего использования в экспериментах по определению фитотоксической активности.
Техника. На поверхность жидкой среды Чапека, содержащейся в колбах Эрленмейера, аккуратно высевают споры исследуемой культуры гриба. Культивирование проводят в термостате при 25-27оС в течение определенного периода (7-10 дней). Длительность культивирования токсинобразующих грибов зависит от вида. Обычно интенсивный рост гриба сопровождается максимальным накоплением токсических веществ.
2 занятие
Цель занятия: изучение фитотоксических свойств микроскопических мицелиальных грибов.
Штаммы грибов: в работе используют мицелиальные грибы, относящиеся к родам Penicillium, Aspergillus, Trichoderma, Fusarium, Alternaria.
В качестве растительных тест-объектов используют семена кукурузы, изолированные листья растений табака и культуру Chlorella vulgaris.
Среды: агаризованная среда Чапека; жидкая среда Чапека; полноценная питательная жидкая среда (ППЖ); стерильная вода; агаризованная питательная среда для выращивания хлореллы (г/л): KNO3 – 5,0; KH2PO4 - 0,3; MgSO4.7H2O – 0,3; пептон - 5,0; глюкоза – 10,0; 1 мл раствора микроэлементов (H3PO3 – 0,5; CuSO4 – 0,04; KI – 0,1; FeCl3 – 0,2; MnSO4 – 0,4; Na2MoO4 – 0,2; ZnSO4 – 0,4); агар-агар – 15,0; рН 6,5.
Оборудование: бумажные фильтры или марлевые сита, чашки Петри, пробочное сверло диаметром 1-2 см, спиртовка, бактериологическая петля.

Задание на занятие:
1) учет результатов по определению токсичности исследуемых грибов на микроорганизмах;
2) определение фитотоксичности по отношению к высшим растениям (биопроба на проростках кукурузы; фитопроба на дисках из листьев и изолированных листьях табака);
3) определение фитотоксичности по отношению к водорослям (биопроба на Chlorella vulgaris).

Ход работы:
Определение фитотоксической активности грибов
Перед определением фитотоксичности культуральную жидкость исследуемого гриба отделяют от мицелия фильтрованием через бумажные фильтры или марлевые сита.

I. Определение фитотоксичности по отношению к высшим растениям
Биопроба на проростках кукурузы
Проростки кукурузы являются наиболее пригодными для первичного отбора грибов-продуцентов фитотоксинов, благодаря значительной скорости прорастания и роста (за сутки прирост достигает 5 см) и четкой зависимости роста от наличия в культуральной жидкости фитотоксинов. В работе используют проростки кукурузы с длиной корней 1-2 см.
Техника. Кончики корней (точку роста и меристематическую зону) проростков кукурузы помещают на 1 час в культуральную жидкость гриба. Контрольные проростки помещают в воду и стерильную питательную среду. После этого проростки раскладывают в чашки Петри на влажную фильтровальную бумагу, чашки помещают в термостат (25-26оС). Через 24 часа культивирования измеряют длину корней в опыте и контроле и рассчитывают фитотоксическую активность корней (%) по формуле:

АФ=100 -
(ДX-ДН)*100


ДK-ДH


где ДХ– средняя длина корней проростков через 24 часа в опыте (мм); ДК– средняя длина корней проростков через 24 часа в контроле (мм); ДН начальная длина корней проростков (мм).
2. Биопроба на дисках из листьев и изолированных листьях растений
Техника. Из листьев растений табака одного возраста вырезают пробочным сверлом диски и смачивают их культуральной жидкостью исследуемых грибов (также можно использовать целые изолированные листья). Диски или листья помещают в чашки Петри на увлажненную водой фильтровальную бумагу и выдерживают несколько дней при температуре 20-22оС. Контрольные чашки содержат диски или листья, не обработанные культуральной жидкостью. Через определенное время (3-5 суток) отмечают появление некротических пятен, ожогов, изменение цвета и другие изменения по сравнению с контролем.

II. Определение фитотоксичности по отношению к водорослям
Биопроба на хлорелле (Chlorella vulgaris)
Техника. Чашки Петри с агаризованной средой Чапека уколом инокулируют исследуемыми грибными организмами. Через 24-48 часов инкубирования в термостате при 26оС эти же чашки заливают вторым слоем агаризованной питательной среды (1-3 мм), содержащей взвесь клеток хлореллы (смыв с одного косяка 3-5-дневной культуры, выращенной на той же среде, в 500 мл питательной среды) и ставят в светотеплицу с температурой 26оС. Через 4-5 суток инкубирования вокруг грибов – продуцентов фитотоксических веществ – образуются ясно выраженные зоны отсутствия роста хлореллы.

3 занятие
Цель занятия. изучение антибиотических свойств микроскопических мицелиальных грибов-антагонистов.
Штаммы: в работе используют мицелиальные грибы, относящиеся к родам Penicillium, Aspergillus, Trichoderma, Fusarium, Alternaria. В качестве тест-объектов используют жидкие культуры Escherichia coli, Erwinia herbicola, Erwinia carotovora, Staphylococcus saprophyticus.
Среды: агаризованная среда Чапека, 1,2% ППА, 2% ППА, жидкая среда Чапека.
Оборудование: линейка, пробочное сверло диаметром 8 мм, бумажные фильтры или марлевые сита, микробиологический шпатель.

Задание на занятие:
1) учет результатов биопробы на проростках кукурузы и вычисление фитотоксической активности ингибирования роста корней по предложенной формуле;
2) учет результатов биопробы на дисках из листьев и изолированных листьях растений табака;
3) учет результатов биопробы на хлорелле;
4) определение антибиотической активности грибов при культивировании на плотных средах;
5)определение антибиотической активности грибов при культивировании в жидких средах.

Ход работы:
I. Определение антибиотической активности грибов на агаризованных средах
1. Метод агаровых блоков
а) Техника. Пробочным сверлом вырезают агаровые блоки из колоний гриба-антагониста, выращенного на агаризованной среде Чапека в чашках Петри. Блоки переносят на поверхность ППА в другой чашке Петри, предварительно засеянной одной из тест-культур. Чашки с агаровыми блоками помещают в термостат на 24 часа при температуре, оптимальной для развития тест-культуры. Если выделяемый грибом антибиотик подавляет рост тест-культуры, то вокруг агарового блока образуется зона отсутствия роста.
б) Техника. В центр чашки Петри помещают по одному блоку, вырезанному из колонии гриба-антагониста, затем в чашку наливают ППА с таким расчетом, чтобы уровень среды был на 1-2 мм ниже уровня блока. После застывания среды по радиусам агаровой пластинки высевают штрихами тест-организмы и чашки помещают в термостат на 24 часа. Отсутствие роста штриха тест-культуры на определенном расстоянии от блока указывает на угнетение ее антибиотиком, образуемым изучаемым грибом-антагонистом. Метод позволяет определить антибиотическую активность по отношению к нескольким тест-организмам.
Метод двойных пластинок
Метод двойных пластинок используется в том случае, если антагонист (гриб) и тест-культура (бактерия) требуют различных сред и температурного режима для своего развития.
Техника. Чашку Петри делят пополам стеклянной перегородкой. В одну половину вносят питательный агар с грибом-антагонистом, другую заливают стерильной агаризованной питательной средой, пригодной для развития тест-культур. После застывания среды на ее поверхность штрихами наносят тест-культуры. Метод позволяет определить антибиотическую активность по отношению к нескольким тест-культурам.

II. Определение антибиотической активности в жидких средах
Для определения антибиотической активности используют культуральную жидкость грибов-антагонистов, выращенных при температуре 26оС в течение 10-15 дней поверхностным способом в жидких питательных средах.
Метод лунок
Техника. 1 мл жидкой тест-культуры вносят в 4 мл расплавленной и охлажденной до 45о 1,2% питательной среды и заливают вторым слоем на поверхность 2% агаризованной среды того же состава в чашке Петри. После застывания среды в центре чашки вырезают лунку и вносят в нее 0,1 мл полученной после фильтрации через бумажные фильтры или марлевые сита культуральной жидкости исследуемого гриба-антагониста. После 24-48 часов культивирования в условиях, оптимальных для тест-культуры, измеряют зону задержки роста вокруг лунки.
2. Метод посева тест-культуры на среду с культуральной жидкостью
Техника. 5 мл культуральной жидкости гриба-антагониста смешивают с 10 мл расплавленного и охлажденного до 45о питательного агара. Полученную смесь выливают в чашку Петри. После застывания среды на ее поверхность сплошным газоном высевается исследуемая тест-культура. В качестве контроля используется питательная среда, содержащая вместо культуральной жидкости гриба 5 мл стерильной воды. Зону задержки роста тест-культуры определяют в процентах от максимальной площади, которую она могла бы занять.


4 занятие
Цель занятия: учет результатов, полученных при изучении антибиотических свойств микроскопических мицелиальных грибов-антагонистов.
Штаммы: в работе используют мицелиальные грибы, относящиеся к родам Penicillium, Aspergillus, Trichoderma, Fusarium, Alternaria. В качестве тест-объектов используют жидкие культуры бактерий Escherichia coli, Erwinia herbicola, Erwinia carotovora, Staphylococcus saprophyticus.
Оборудование: линейка.

Задание на занятие:
1) учет результатов по выявлению антибиотической активности грибов при культивировании на агаризованных средах (метод агаровых блоков, метод двойных пластинок);
2) определение антибиотической активности грибов при культивировании в жидких средах (метод лунок, метод посева тест-культуры на среду с культуральной жидкостью гриба);
3) оформление на основании полученных результатов таблицы «Биологическая активность микроскопических мицелиальных грибов».


Программа спецкурса «Важнейшие группы эукариотических микроорганизмов»

Введение
Общая характеристика эукариотических микроорганизмов. Основные отличия клеток эукариотических микроорганизмов от прокариотических. Важнейшие группы эукариотических микроорганизмов и научное обоснование отнесения простейших, водорослей и грибов к эукариотическим микроорганизмам. Традиционная и современная классификационные схемы эукариотических микроорганизмов.

Простейшие (Protozoa)
Простейшие как объект микробиологии. Краткая характеристика основных типов простейших в соответствии с классификационной схемой; их клеточное строение, способы размножения, жизненные циклы, физиолого-биохимические особенности, основные типы питания и области распространения на примере важнейших представителей каждого типа. Простейшие как объект научных исследований. Практическое значение простейших.

Водоросли (Algae)
Общая характеристика водорослей как эукариотических микроорганизмов. Основные признаки, отличающие водоросли от высших растений и животных. Структурное разнообразие водорослей, особенности фотосинтетического аппарата, способы размножения, места обитания. Краткая характеристика основных отделов водорослей (Euglenophycota, Chlorophycota, Bacillariophycota, Chrysophycota, Xanthophycota). Сравнительная характеристика важнейших представителей основных отделов с учетом их морфологических и физиологических особенностей и циклов развития. Использование одноклеточных водорослей как модельных объектов в научных исследованиях. Значение водорослей в народном хозяйстве.

Грибоподобные протисты
Слизевики (Myxomycota)
Примитивная организация группы микроорганизмов, близких к грибам. Особенности строения и качественный состав вегетативного тела слизевиков. Плазмодий и склероций. Особенности полового и бесполого размножения слизевиков. Сапротрофные формы миксомицетов и облигатные внутриклеточные паразиты. Наиболее вредоносные для сельскохозяйственных растений виды: циклы и особенности развития, характер вызываемых ими заболеваний.

Акразиомицеты (Acrasiomycota)
Группа акразиевых как низшие микроорганизмы. Стадии и особенности развития, внешнее сходство и существенные отличия с истинными миксомицетами. Циклы развития и физиолого-биохимические особенности наиболее изученных представителей данного отдела эукариотических микроорганизмов.

Хитридиомицеты (Chytridiomycota)
Общая характеристика и классификация отдела. Основные особенности представителей отдела: степень развития вегетативного тела, способы размножения, образ жизни. Циклы развития, физиологические и морфологические особенности важнейших представителей. Большое практическое значение хитридиомицетов, как фитопатогенов. Так и паразитов животных.

Оомицеты (Oomycota)
Общая характеристика отдела. Строение вегетативного тела, особенности полового и бесполого размножения, строение и состав оболочки клеток, среда обитания. Принципы классификации отдела. Циклы развития и особенности жизнедеятельности важнейших представителей отдела. Экономическая важность некоторых оомицетов, являющихся активными паразитами высших растений и животных.

Грибы (Fungi, Mycota)
Основные принципы, лежащие в основе классификации грибных организмов. Традиционная и современная классификационные схемы грибов. Общие черты и существенные различия грибов и высших растений. Макро- и микромицеты. Микромицеты как эукариотичесие микроорганизмы. Эволюция грибов.
Основные типы питания грибов (сапротрофы, облигатные и факультативные паразиты, симбионты) и связанные с этим особенности их жизнедеятельности. Основные способы размножения грибов (вегетативное, бесполое, половое). Разнообразные формы и характерные особенности полового процесса у грибов. Важнейшие признаки, лежащие в основе классификации (особенности организации вегетативного тела, химический состав клеточных стенок, особенности размножения и жизнедеятельности, распространения в природе и образа жизни).

Зигомицеты (Zygomycota)
Общая характеристика отдела. Особенности полового процесса и бесполого размножения, строения мицелия, образа жизни. Принципы классификации. Народно-хозяйственное значение фитопатогенных грибов порядка Mucorales. Особенности строения, циклы развития и характер вызываемых ими заболеваний. Научный и практический интерес к грибам порядка Entomophthorales – паразитам насекомых: их жизненные циклы и физиолого-биохимические особенности. Характерные признаки данных грибов и узкая специализация к поражаемым видам. Возможность применения энтомофторовых грибов как средства биологической борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве.

Аскомицеты (Ascomycota)
Особенности организации мицелия аскомицетов, относящихся к высшим грибам. Особенности бесполого размножения. Формы полового процесса. Форма и строение асков, характер их формирования и размещение. Основы классификации аскомицетов. Циклы развития, характерные особенности жизнедеятельности и значение важнейших представителей данного отдела. Использование аскомицетов в генетических исследованиях. Порядок Endomycetales. Общая характеристика дрожжей. Особенности строения вегетативного тела и процессов размножения дрожжевых грибов. Практическое значение семейства Saccharomycetaceae. Использование дрожжей в микробиологическом производстве в качестве продуцентов биологически ценных веществ. Роль дрожжей в разработке общих проблем генетики эукариот. Дрожжи-сахаромицеты как важнейший объект генной инженерии.

Базидиомицеты (Basidiomycota)
Базидиомицеты как эукариотические микроорганизмы. Основная характеристика и систематика представителей отдела. Организация мицелия, морфологические и физиолого-биохимические особенности жизнедеятельности и особенности размножения; особенности полового процесса и циклы развития; биологическое и практическое значение и особенности образа жизни важнейших базидиомицетов.

Дейтеромицеты (Fungi imperfecti)
Основная характеристика отдела. Особенности систематики грибов, относящихся к данному отделу. Строение мицелия и пути его формирования у несовершенных грибов. Характерные особенности процессов размножения и циклов развития важнейших представителей. Гетерокариозис и парасексуальный процесс. Основные физиолого-биохимические характеристики, распространение в природе и значение в практической деятельности человека данных грибов. Дейтеромицеты – продуценты антибиотиков и антагонисты фитопатогенных микроорганизмов; возбудители опасных заболеваний животных и растений. Хищные гифомицеты (приспособление к хищному образу жизни и значение в природе).

ЛИТЕРАТУРА

Рейвн П., Эверт Р., Айкхорн С. Современная ботаника. - М.:Мир, 1990. – Т.1. – 348 с.
Саут Р., Уиттик А. Основы альгологии. – М.:Мир, 1990. – 597 с.
Билай В.И. Основы общей микологии. – Киев:Наукова думка, 1989. - 204 с.
Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов. – М.:Изд-во МГУ, 1988. – 229 c.
Микроорганизмы – возбудители болезней растений / Под ред. В.И.Билай. – Киев.:Наукова думка, 1988. - 552 с.
Берри Д. Биология дрожжей. – М.:Мир, 1985. – 95 с.
Захаров И.А. Курс генетики микроорганизмов. – Мн.:Вышэйшая школа, 1978. – 192 с.
Хадорн Э., Венер Р. Общая зоология. – М.:Мир, 1989. – 528 с.
Жизнь животных. – М.:Просвещение, 1987. – Т.1. – С.40-123.
Билай В.И., Курбацкая З.А. Определитель токсинобразующих микромицетов. – Киев.:Наукова думка, 1990. - 233 с.
11.Методы экспериментальной микологии / Под ред. В.И.Билай. –
Киев.:Наукова думка, 1982. – 550 с.











Учебное издание

Важнейшие группы
микроорганизмов

Методические указания

Для студентов специализации
Н.04.01.06 «Микробиология»

А в т о р ы – с о с т а в и т е л и:
Лысак Владимир Васильевич
Блажевич Ольга Валентиновна


Ответственный за выпуск О. В. Блажевич

Налоговая льгота – Общегосударственный классификатор
Республики Беларусь ОКРБ 007 - 98, ч. 1; 22.11.20. 600.

Подписано в печать 18.12.2000. Формат 60х84/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,53. Тираж 50 экз. Зак.

Белорусский государственный университет.
Лицензия ЛВ № 315 от 14.07.98.
220050, Минск, пр. Ф. Скорины, 4.

Отпечатано на копировально-множительной технике
биологического факультета Белгосуниверситета.
220050, Минск, ул. Курчатова, 5.








13PAGE 142415


13PAGE 141615




Заголовок 1 Заголовок 2 Заголовок 3 Заголовок 4 Заголовок 5 Заголовок 6 Заголовок 7 Заголовок 8 Заголовок 915

Приложенные файлы

  • doc 5830439
    Размер файла: 155 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий