MR_LF_stud_org_lab (1)


Государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Тихоокеанский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Кафедра Микробиологии и вирусологии
УТВЕРЖДЕНО
на заседании кафедры
протокол №__8_ от «__29_»__04____2013г.Заведующая кафедрой Шаркова В.А.
д.м.н., профессор
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СТУДЕНТОВ
к практическому занятию
на тему: «Организация, оборудование, режим микробиологической лаборатории - общего и специального назначения. Микроскопический метод исследования. Морфология бактерий. Размеры микробной клетки и их измерение»
Модуль ____________________Общая микробиология___________________________
(наименование модуля)
учебной дисциплины (модуля) _____микробиология, вирусология__________________
для специальности___ 060101 Лечебное дело_____________________________
(шифр-наименование специальности)
курс ___2_______ семестр ____4_____
Составитель: Зайцева Е.А., д.м.н., профессор
(Ф.И.О., ученая степень, звание, должность)
Рецензент: Шаркова В.А., д.м.н., профессор
(Ф.И.О., ученая степень, звание, должность)
Владивосток - 2013г.
Тема занятия: Организация, оборудование, режим микробиологической лаборатории - общего и специального назначения. Микроскопический метод исследования. Морфология бактерий. Размеры микробной клетки и их измерение.
Мотивация изучения темы. Выпускники любого факультета медицинского вуза в ряде случаев (возникновение эпидемий в отдалённых районах при отсутствии профильных лабораторий, необходимости срочной предварительной диагностики особо опасных инфекций, которая позволяет своевременно ввести карантин и требовать развёртывания специальной лаборатории и т.д.) должны:
- уметь организовать рабочее место микробиолога;
- выбрать наиболее целесообразное направление исследований для обнаружения идентификации возбудителей инфекционных заболеваний;
- иметь навыки безошибочного выполнения ряда микробиологических и противоэпидемических мероприятий;
- представлять взаимосвязь производимых микробиологических манипуляций с прочими методами обследования больного, отчётливо понимать, что, без прямого обнаружения возбудителя или без выявления ряда доказательных косвенных признаков пребывания последнего в организме, нельзя поставить диагноз инфекционного заболевания, нельзя отличить его от неспецифических (безмикробных) патологических процессов.
Вот почему умение и навыки, приобретённые уже на первом занятии, необходимы для дальнейшего усвоения курса микробиологии, для выполнения в будущем профессиональной работы врача-эпидемиолога, инфекциониста, участкового терапевта и других. Более того, они - основа общей профессиональной грамотности врача любого профиля.
3. Цели занятия:
Общая цель: изучение темы направлено на формирование компетенций по ФГОС-03 по специальности 060101 Лечебное дело: формировать способность и готовность использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК-1), формировать умение работать с научной литературой, анализировать информацию, вести поиск, выделять основные положения, делать выводы, развивать личностные качества (ПК-31, ПК-32). Изучить структуру микробиологических лабораторий общего и специального профиля. Знать основные объекты, направления и методы исследования, которые можно осуществлять в любой лаборатории и тех особенностях, которые крайне важны для лаборатории специального назначения (ПК-6, ПК-7). Иметь представление об оборудовании, необходимом для реализации исследований, о диагностическом обеспечении лабораторий общего и специального профиля (ПК-6, ПК-14).Способность и готовность применять методы асептики и антисептики, использовать медицинский инструментарий, проводить санитарную обработку лечебных и диагностических помещений медицинских организаций (ПК-7). Активно использовать современные достижения науки, особенно подчеркивая роль отечественных ученых в разработке данной темы (ОК-3). Способность и готовность анализировать информацию, полученную с помощью методов светооптической и других видов микроскопии, основные нормативно-правовые документы (СП, СНиП) по охране здоровья населения (по безопасности работы с микроорганизмами) (ОК-1, ПК-11, ПК-31).
Конкретные цели и задачи.
После изучения темы студент должен:
«Знать» - классификацию, морфологию микроорганизмов, микроскопический метод диагностики; способы выражения концентрации веществ в дезинфицирующих растворах, способы приготовления дез. растворов заданной концентрации; структуру микробиологических лабораторий общего и специального профиля.
«Уметь» - забирать инфекционный материал, заполнять бланки направлений для микробиологического исследования, приготовить и микроскопировать микропрепарат с помощью иммерсионного объектива и светового микроскопа; описать морфологические изменения изучаемых микроскопических препаратов; работать с увеличительной техникой (микроскопами, оптическими и простыми лупами), оценивать результаты микроскопического исследования; применить методы асептики и антисептики, использовать медицинский инструментарий, проводить санитарную обработку диагностических помещений; пользоваться учебной, научной, научно-популярной литературой, сетью Интернет для профессиональной деятельности; диагностировать возбудителей паразитарных заболеваний человека на препарате, слайде, фотографии.
«Владеть» - навыками микроскопирования и анализа микропрепаратов и электронных микрофотографий; навыками работы простейшими медицинскими инструментами (пинцет, бактериологическая петля); методами работы с биологическим, фазовоконтрастным, поляризационным, люминесцентным микроскопами; навыками анализа информации, полученную с помощью методов светооптической и других видов микроскопии, навыками соблюдения санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологических лабораториях при работе с материалом I - IV групп безопасности; техникой приготовления микропрепаратов: мазков из чистых культур бактерий, из мокроты, гноя, слизи для обнаружения микроорганизмов; навыками окраски мазков простыми способами (водными растворами фуксина и метиленовой синьки); техникой микроскопии препаратов-мазков в световом микроскопе с иммерсионным объективом; дифференциацией микроорганизмов по морфологическим признакам в микропрепаратах; методами обеззараживания отработанного инфицированного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды; способами антисептической обработки рук, контаминированных исследуемым материалом и культурами патогенных микробов.
Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО КОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ:
1. Микробиологическая лаборатория общего и специального назначения:
- специализация лаборатории;
- цели, задачи лабораторий;
- оснащение лаборатории и рабочего места;
- режим работы в лаборатории;
- методы микробиологического лабораторного исследования.
2. Микроскопический метод исследования:
- цели, задачи, диагностические возможности;
- виды микроскопов, их назначение, разрешающая способность;
- ход лучей в световом и тёмнопольном микроскопах с иммерсионной системой и без неё;
- микрометрические приспособления и их назначение.
3. Морфология микроорганизмов:
- понятие, основные морфологические группы бактерий;
- методы изучения морфологии микроорганизмов.
4. Микроскопический анализ препаратов:
- способы подготовительной обработки предметных стёкол;
- приготовление мазков из агаровых и бульонных культур микроорганизмов,
жидкого (кровь) и вязкого (мокрота) материала;
- фиксация (назначение, методы);
- простая окраска;
- определение размеров бактерий.
5. Люминесцентный метод исследования:
- цели, задачи, возможности;
- оснащение метода.
4.2. При подготовке к практическому занятию студенту необходимо в рабочей тетради заполнить протокол практического занятия по теме (зарисовать препараты, составить комплексные таблицы, развернутые схемы, заключения и т.д.):
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫПОЛНЕНИЮ ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ С ПОЛНЫМ РЕГЛАМЕНТОМ ПРОТОКОЛА ЗАНЯТИЯ И ЕГО ОФОРМЛЕНИЕМ
№ Наименование учебного элемента
(задания) Методическое
решение Регламент протокола
1. Организация и режим работы бактериологической лаборатории Приложение 1 Записать в протокол,
зарисовать схему
2. Микроскопы: виды, устройство, принцип работы, возможности.
Дополнительные устройства к световому микроскопу Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Быкова А.С., Воробьева А.А., Зверева В.В. - М., 2008. С.15-19.
Приложение 2, 3 Зарисовать таблицу при самоподготовке
3. Морфология микроорганизмов.
Размеры микроорганизмов, способы их измерения Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С.- М., 2003. С.23-26;
Под ред. Быкова А.С., Воробьева А.А., Зверева В.В. - М., 2008. С.13-21. Зарисовать основные группы бактерий
4. Микроскопический метод.
Подготовка обезжиренных стёкол для приготовления препарата из материала исследования.
Фиксация препарата.
Окраска его простым способом Приложение 4 - 7 Записать этапы исследования. На занятии приготовить микропрепараты, их микроскопировать, зарисовать, изучить демонстрационные препараты
5. Микроскопия препарата с иммерсией Приложение 8 Записать при самоподготовке
6. Правила работы с иммерсионным объективом. Ход лучей в иммерсионном объективе Приложение 8. Табличный фонд учебной комнаты Зарисовать на практическом занятии.
4.3. Работа с контрольно-обучающими тестами
Выбрать правильный ответ:
1. Какая микробиологическая лаборатория является лабораторией общего назначения?
а) бактериологическая
б) вирусологическая
в) микологическая
г) паразитологическаяд) особо - опасных инфекций
2. Какие помещения предусмотрены в микробиологической лаборатории?
а) приёмная для заразного материала
б) комната для лабораторных анализов
в) автоклавная стерилизационно - убивочнаяг) средоваркад) боксы с бактерицидными лампами
е) моечная
ж) комната для обработки и стирки мягкого инвентаря (халатов, салфеток, масок и пр.)
з) комната выдачи анализов
и) комната персонала с раздевалкой
к) все выше перечисленное
3. Что надо сразу сделать, если разлил пробирку с культурой?
а) срочно убрать, вымыть горячей водой
б) залить дез. раствором на 30-60 минут
в) подмести веником в совок
г) после 60 минут дезинфицирования убрать, убить в автоклаве
4. Чем следует фиксировать мазок из крови, препарат - отпечаток?
а) жаром
б) химическим фиксатором
в) охлаждением
г) фиксировать не нужно
5. Чем следует фиксировать мазок из плотного материала (испражнения)?
а) жаром
б) 60% этанолом
в) эфиром
г) физиологическим раствором
6. Чем следует фиксировать мазок из чистой культуры микробов?
а) жаром
б) 60% этанолом
в) эфиром
г) физиологическим раствором
7. Зачем проводят фиксацию мазков?
а) прикрепление препарата к стеклу
б) инактивация микробов
в) обеспечение безопасности работы
г) улучшение восприятия красителя микробом
д) все вышеперечисленное
8. Каково качество фиксации микропрепарата, если окрашенные микроорганизмы двигаются?
а) хорошее
б) плохое
в) среднее
г) не зависит от качества фиксации микропрепарата
9. Дать определение морфологии микробов:
а) форма особей
б) величина особей
в) взаимное расположение особей
г) все выше перечисленное
10. Бактерии по своим биологическим свойствам относятся к:
а) эукариотам
б) прокариотам
в) грибам
г) простейшим
11. Укажите методы определения размеров микроорганизмов:
а) центрифугирование с известной скоростью
б) электронная микроскопия
в) измерение величины с помощью окуляр- и объект микрометра
г) фильтрация через фильтры с известным диаметром пор
д) все выше перечисленные методы
12. К клеточным формам микроорганизмов не относятся:
а) вирусы
б) бактерии
в) простейшие
г) грибы
13. Для дезинфекции рук используют:
а) 0,1% р-р хлорамина
б) 1% р-р хлорамина
в) 10% р-р хлорамина
г) 1% р-р карболовой кислоты
14. Смесь Никифорова – это смесь равных частей:
а) этилового спирта и этилового эфира
б) ацетона и этилового эфира
в) метилового спирта и этилового раствора
г) хлороформа и этилового спирта
15. Смесь Никифорова используют:
а) для обезжиривания и хранения предметных стекол
б) для обеззараживания поверхностей
в) для консервации сывороток и питательных сред
г) для обеззараживания пипеток
16. По форме бактерии бывают шаровидные, палочковидные, извитые и ветвящиеся. Бактерии, которые имеют извитую форму, называются:
а) кокками
б) спирохетами
в) актиномицетами
г) палочками
17. Тинкториальные свойства бактерий - это:
а) характер их роста на питательных средах
б) способность окрашиваться различными красителями
в) их форма и взаимное расположение
г) все перечисленное
18. Назовите основные морфологические группы бактерий:
а) шаровидные, палочковидные, извитые, нитевидные
б) спириллы, вибрионы, монококкив) стрептококки, диплобактерии, спириллы
г) шаровидные, палочковидные
19. К микроорганизмам относят:
а) доклеточные формы
б) клеточные формы
в) и те и другие
г) не те и не другие
20. Понятие полиморфизм определяет:
а) индивидуальную изменчивость микроорганизмов
б) способность окрашиваться различными красителями
в) их форма и взаимное расположение
г) все перечисленное
Этапы проведения практического занятия.
№ п/п Название этапа Цель этапа Время
(минуты)
1 2 3 4
Вводная часть занятия 5-10 %
Организация занятия Мобилизовать внимание студентов на данное занятие 5
Определение темы, мотивации, цели, задач занятия Раскрыть практическую значимость занятия в системе подготовки к профессиональной деятельности, сформировать мотив и, как следствие, активизировать познавательную деятельность студентов 5-10
Основная часть занятия %
1 2 3 4
Контроль исходных знаний, умений и навыков Проверка готовности студентов к занятию, выявление исходного уровня знаний, умений и навыков 15-20
Общие и индивидуальные задания на СРС в учебное
время Дифференцированное ориентирование студентов к предстоящей самостоятельной их работе 20-30
Демонстрация методики Показать ориентировочную основу действия (ООД) 20-30
Управляемая СРС в учебное время Овладение необходимыми общекультурными, профессиональными компетенциями, исходя из конкретных целей занятия 20-30
Реализация планируемой формы занятия (семинар, практическая работа) Контроль результатов обучения и оценка с помощью дескрипторов 45
Итоговый контроль Оценивание индивидуальных достижений студента, выявление индивидуальных и типичных ошибок и их корректировка 10-15
Заключительная часть занятия 5-10 %
Подведение итогов занятия Оценка деятельности студентов, определение достижения цели занятия 5 -10
Общие и индивидуальные задания на СРС во внеучебное время Указание на самоподготовку студентов, ее содержание и характер 5
Ориентировочная основа действия (ООД) для проведения самостоятельной работы студентов (СРС) в учебное время:
Подготовить к проверке материалы по СРС (письменные ответы на вопросы домашнего задания, лекции по теме занятия).
Охарактеризовать и определить мотивацию, цель и задачи занятия.
Входной контроль уровня знаний.
Обсуждение выполнения приготовления стекол и способа окраски микропрепаратов.
Выполнить самостоятельно приготовление препарата и его окраску простым методом.
Итоговый контроль уровня знаний.
Источники информации:
Список рекомендуемой литературы:
Основная:
Микробиология и иммунология / Под ред. академика РАМН, проф. А.А. Воробьева //М.: Медицина, 2008.464с.
Поздеев О.К. Медицинская микробиология /М.: ГЭОТАР-МЕД, 2008. 768 с.
Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология /М., 2008. 736 с.
Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2005. С. 6 - 32, 41 - 45.
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006. С. 17 - 50.
Шаркова В.А., Забелина Н.Р., Воропаева Н.М., Диго Р.Н., Коршукова О.А., Карпенко Н.В. Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по общей микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов медицинских вузов /Учебно-методическое пособие. 2011. Владивосток: Медицина ДВ. 179 с.
Дополнительная:
Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб, 2002. С. 7 - 32.
Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С.8 - 23.
Биргер М.О. (под ред.) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., 1982. С. 13 - 19.
Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. М., 2003. С.15 - 26.
Дроздов С.Г. и др. Основы техники безопасности в микробиологических лабораториях. М. С. 5 - 6.
Красильников А.П., Романовская Т.Р. Микробиологический словарь - справочник. М., 1999. С. 208 - 210.
Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» (СП 1.3.2322-08) от 01.05.2008 г.
Материальное обеспечение:
а) наглядные пособия (таблицы, схемы, слайды, графики, учебный фильм по технике окраске микропрепаратов, электронный атлас учебных микропрепаратов)
б) микроскопы
в) технические средства обучения (проектор, компьютер)
г) спиртовки, бактериологические петли, красители, стекла
Оценивание уровня сформированности компетенций обучающихся проводится по балльно – рейтинговой системе.
Приложение 1
РЕЖИМ РАБОТЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
(Извлечение из санитарных правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IУ групп патогенности и гельминтами», Постановление от 28.01.2008 г. №4).
Работники бактериологической лаборатории должны постоянно помнить при работе с заразным материалом о возможности заразиться и перенести инфект за пределы лаборатории. Поэтому они должны быть особенно внимательны, опрятны и педантичны в работе.
В бактериологических лабораториях нужно соблюдать следующие правила и режим работы:
1. Находиться в помещении бактериологической лаборатории, а тем более работать обязательно в халате, шапочке (косынке), в отдельных случаях в маске и резиновых перчатках.
2. Без надобности переходить из одного помещения лаборатории в другое нельзя. При выходе из лаборатории халат и другую спецодежду следует снимать. Руки обязательно вымыть с мылом.
3. Особо опасные работы проводить в специальных боксах, облучаемых после их проведения бактерицидными лампами.
4. Для работы пользоваться только отведённым местом и оборудованием. Перекладывать заразный материал или предметы, соприкасающиеся с ним, на другое рабочее место (стул, подоконник и т.д.) запрещается.
5. Все лишние предметы не следует держать на рабочем месте. Сумки, тетради, книги должны быть спрятаны в стол или целлофановые мешки.
6. Категорически запрещается курить и принимать пищу в лаборатории.
7. По окончании работ в лаборатории рабочее место и руки обрабатывают дезинфицирующим раствором или 70% спиртом с последующим мытьем рук с мылом.
МЕРОПРИЯТИЯ В СЛУЧАЕ АВАРИИ:
При аварии во время работы с инфекционным материалом (бой посуды, разбрызгивание из пипетки и т.д.) необходимо тщательно обеззараживать оборудование и инфицированные предметы. Для этого осуществляются следующие мероприятия:
при аварии с разбрызгиванием ПБА:
- все находящиеся в помещении лица немедленно прекращают работу и, задержав дыхание, выходят из заразного помещения в пред бокс, плотно закрывают дверь, сообщают о случившемся руководителю подразделения;
- для обработки используют дезинфицирующий раствор, эффективный в отношении соответствующего инфекционного агента (3 - 5 % раствор хлорамина или фенола), который заливают в те места, куда попадает заражённый материал, а боковые поверхности мебели инвентаря, приборов, аппаратов и стены обмывают тампоном, смоченным тем же дез. раствором.
- через 2 часа после первичной обработки собирают тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, осколки разбитой посуды, погружая их в емкость с дезинфицирующим раствором; лабораторную посуду с посевами, находившуюся в момент аварии на рабочих поверхностях, погружают в емкость с дезинфицирующим раствором или обтирают салфеткой, смоченной дез. раствором, и помещают в емкость для автоклавирования;
- по окончании дезинфекции воздух и поверхности в помещении обеззараживают бактерицидными лампами по режимам согласно нормативным документам; спустя 2 часа проводят уборку помещения, после чего работа может быть возобновлена.
- заразную одежду снять и замочить в дезинфицирующем растворе (1 % растворе хлорамина); обувь обмывать тампоном, обильно пропитанным дез. раствором;
- открытые участки кожи лица, рук и др. обрабатывать дез. раствором или 70 % этиловым спиртом. При загрязнении слизистых оболочек: рот полоскать либо 3 % раствором соды, либо 0,5 % раствором соляной кислоты или раствором марганцево-кислого калия 1:10000. Глаза промывают раствором борной кислоты и струёй воды, рот прополаскивают 0,05 % раствором марганцево-кислого калия или 0,1 % раствором борной кислоты.
2) при аварии без разбрызгивания ПБА:
- не выходя из помещения накладывают тампон с дез. средством на место контаминации ПБА поверхности объекта;
- после окончания дез. обработки, выйти из помещения, где произошла авария, снять и замочить халат в дез.раствор;
- открытые части тела обработать дезинфицирующим раствором или 70% спиртом.
3) при аварии, связанной с нарушением целостности кожных покровов:
- работу прекращают;
- руки обрабатывают дез.раствором, снимают перчатку и выдавливают из ранки кровь в дезинфицирующий раствор;
- на место ранения накладывают на 4-5 мин. компресс из дезинфицирующего раствора или 70% этилового спирта;
- при работе с вирусами кровь выдавливают в сухую стерильную салфетку и обрабатывают ранку 5% настойкой йода без применения дезинфицирующего раствора.
Приложение 2
ОСНОВНЫЕ ВИДЫ МИКРОСКОПОВ
Микроскоп – (греч. micros – малый, scorpeos – смотрю) – оптический прибор, предназначенный для исследования невидимых невооруженным глазом объектов.
В микробиологии с помощью микроскопа изучают живые и убитые клетки микроорганизмов как в окрашенном, так и в неокрашенном виде.
Микроскоп или
оптическое
устройство Особенность и
сущность Разрешающая
способность Назначение
Световой
микроскоп
(МБИ - 1, 2, 3, 6, 11) Все объекты рассматриваются в проходящем свете сухим и иммерсионным объективом Разрешающая способность - 0,4-0,2 мкм. Увеличение при данной длине тубуса равно произведению увеличений объектива и окуляра. Минимальное - 630 (для иммерсионного объектива) и максимальное – 1350 Используется для изучения морфологии, структуры, подвижности и тинкториальных свойств микроорганизмов
Люминесцентный микроскоп Использование ультрафиолетовых лучей и люминесциру-ющих красителей, способных светиться (флю-оресцировать) под УФ - лучами. Позволяет наблюдать микроорганизмы в излучаемом ими свете и цвете Разрешающая способность - 0.1 мкм. Повышение её связано с использованием коротковолновых ультрафиолетовых лучей. Максимальное увеличение - в 3000 раз. Преимущество - цветное изображение, высокая контрастность, возможность исследовать живые объекты Используется не только для изучения морфологии, и тинкториальных свойств, но и для исследования процессов жизнедеятельности микробной клетки
Электронный микроскоп Принцип действия и устройства подобен таковым у обычного светового микроскопа. Различия - вместо источника света – источник электроволн (вольфрамовая проволока, нагреваемаяэлектротоком,
вместо оптических линз - электромагнитные) Разрешающая - способность 0.001 мкм. Первое промежуточное увеличение в 130 раз, от проекционной линзы - в 20 - 200 раз, в целом - 2500-25 000, максимум – в 100 000 раз Широко используется для изучения вирусов, мельчайших микроорганизмов. В бактериологии используется для изучения деталей тонкого строения
Инвертированные
микроскопы (тёмнопольный, фазово-контрастный)
Исследования проводят в проходящем свете в светлом или тёмном поле с применение метода фазового контраста. МБИ - 12,13 снабжены собственными столиками-термостатами, кинокамерами. Линзы окуляра и объектива дают обратное увеличенное изображение Позволяет проводить широкий круг микроскопических исследований, визуальное наблюдение, фотографирование, применение светлого и тёмного полей в прямом и отражённом свете, прямое и косое освещение, микроскопирование в поляризованном свете, методом фазовых контрастов, в свете люминесценции.
Методы наблюдения в темном поле, фазово-контрастный используется с целью исследования живых клеток микроорганизмов
Стереомикроскоп Даёт подсвет в прямом и косопроходящем свете Наиболее пригоден для крупных объектов (грибов) Изучение колоний, микологических культур
Приложение 3
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА К МИКРОСКОПУ
Бинокулярная
насадка АУ - 12 Приближает микроскопию к условиям естественного зрения. Повышение трудоспособности работающего с микроскопом
Разрешающая способность несколько повышена Применим к любому микроскопу
Микрометр
- объект
- окуляр Объект-микрометр и окуляр-микрометр позволяют определить размеры бактерий с помощью расчётных сеток Разрешающая способность несколько повышается, даёт возможность изучать микроорганизмы в нативном состоянии
Для изучения
размеров
Темнопольный
конденсор к
световому
микроскопу Затемнение центральной части конденсора и, как следствие, боковое освещение объекта позволяет на тёмном фоне препарата видеть микроорганизмы в отражённом от них свете
Разрешающая способность повышается То же, что и при темнопольноймикроскопии
Фазово-контрастное
устройство
(объектив) При обычной микроскопии в проходящем свете повышает контрастность и отражение за счет
превращения фазовых смещений световой волны в амплитудные, улавливаемые глазом В отличие от темнопольного устройства - даёт возможность наблюдать контрастные живые неокрашенные объекты на световом фоне
Используется для
наблюдения заживыми биообъектами
Столик-термостат Сохраняет подвижность объекта Сохраняет
жизнеспособность При анализе
простейших
Приложение 4
ОБЕЗЖИРИВАНИЕ СТЁКОЛ проводят одним из приведённых способов:
1) Новые стёкла кипятят 15 минут в 1 % растворе соды (или в мыльной воде), затем промывают водой, кладут в слабый раствор соляной кислоты, вновь тщательно промывают водой.
2) Стёкла, бывшие в употреблении, сначала помещают в концентрированную серную кислоту или в смесь из 100 частей серной кислоты и 50 частей двухромовокислого калия и 1000 частей воды на 2 часа, после чего кипятят в щёлочи, тщательно промывают водой.
3) Погрузить стёкла в смесь 6 % хромовокислого калия и серной кислоты на 24 часа, после чего тщательно промывают водой. Хранят стёкла в 96 % растворе спирта.
4) Стекла можно также обрабатывать жидкостью следующего состава (по Цеттнову (Zettnow), 1899): Kalii bichromici - 20 г, Acidi sulfuric crudi – 20 г, воды – 200,0 мл. После 10 минут кипячения в этой смеси промывают стекло 5 минут в слабом растворе щелочи, а затем промывают водой и, наконец, спиртом.
Перед работой стёкла протереть кусочком сухого мыла, затем тщательно до блеска протереть кусочком марли.
Для продолжительного хранения чистые обезжиренные стекла помещают в банки с притертыми пробками со смесью Никифорова (смесь равных объемов этилового 96% спирта и серно-кислого (наркозного) эфира) или в 960 спирте или промытыми и вытертыми досуха.
Оценка результата. На чистом стекле капля водопроводной воды или изотонического раствора натрия хлорида (NaCl) свободно растекается по всей поверхности, на жирном – дробится на множество мелких капель.
Приложение 5
ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ОКРАСКА МИКРОПРЕПАРАТОВ:
1. Подготовить для микроскопии 4 предметных стекла:
- обезжирить предметные стёкла, тщательно протерев их мылом и марлей;
- стёкла с помощью пинцета внести в пламя спиртовки, прогреть, охладить;
- тщательно протереть сухим ватным тампоном.
2. Приготовить 3 мазка из микробов, выросших на жидкой среде (обратить внимание на правильное положение рук: правой - держащей пробирку с ростом микробов в МПБ и левой - бактериальную петлю и ватную пробку);
- обжечь петлю в пламени спиртовки;
- охладить;
- открыть пробку пробирки левой рукой (мизинцем), обжечь её края над пламенем спиртовки;
- внести в МПБ петлю, взять 1 каплю культуры;
- обжечь края пробирки, пробку, закрыть пробирку, поставив её в штатив (не выпуская из правой руки петлю с материалом);
- обезжиренное, обожжённое в пламени спиртовки и охлаждённое предметное стекло взять большим и указательным пальцами в левую руку;
- петлёй материал нанести на стекло, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности в виде круга;
- препарат высушить на воздухе и затем фиксировать методом фламбирования или прогрева, трижды внося в пламя спиртовки, охладить;
- пипеткой налить на мазок 3-4 капли красителя (метиленовый синий) на 3-4 мин.;
- промыть препарат водой, высушить на воздухе. Мазок готов для микроскопии:
3. Приготовить мазок из микробной культуры, выросшей на плотной среде - МПА:
- на обезжиренное стекло нанести каплю воды или физиологического раствора;
- с поверхности среды (обратить внимание на правильность положения пробирки с ростом скошенной поверхностью кверху), петлёй осторожно взять материал;
- обжечь края пробирки, пробку закрыть, поставить в штатив, не выпуская из рук петлю с культурой;
- внести материал петлёй в каплю воды на предметном стекле, равномерно растереть, на стекле с обратной стороны обозначить овалом или квадратом место нанесения материала;
- высушить на воздухе;
- фиксировать фламбированием, внося в пламя спиртовки трижды, охладить.
Приложение 6
СПОСОБЫ ФИКСАЦИИ мазков из микробов и смешанного материала
Самым распространённым методом фиксации бактерий считается обработка жаром, что осуществляется путём трёхкратного проведения препарата мазком вверх над пламенем спиртовки или газовой горелки. Препарат находится в пламени спиртовки не более 3 сек. Для проверки надежности фиксации свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной стороне левой кисти. При правильном фиксировании стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущений ожога. После чего препараты из бактерий окрашиваются разными способами. Метод применим при работе с чистой культурой микробов.
Фиксация химическими веществами используется для выявления и дифференциации структурных элементов: жгутиков, протоплазмы, нуклеоида, оболочки, при работе со смешанным материалом (кровь, отпечатки органов, соскобы со слизистых, гной, мокрота).
В качестве фиксаторов используют:
- метиловый спирт (фиксируют 5 минут),
- этиловый спирт 96% (фиксируют 10 - 20 минут),
- смесь Никифорова: равные объёмы спирта и эфира (фиксируют 10 - 20 минут),
- спирт - формол: смесь 5мл неразведённого формалина мл и 96 % этилового спирта – 95 мл (фиксируют 15 минут),
- жидкость Буэна (Bouin, 1898): неразбавленный формалин 10 мл, ледяная уксусная кислота 2 мл, насыщенный водный раствор пикриновой кислоты 30 мл (фиксируют 5 - 10 минут),
- ацетон (фиксируют 5 минут),
- жидкость Карнуа (Karnoy) - ледяная уксусная кислота 10 мл, хлороформ 30 мл и 96 % спирт 60 мл (фиксируют 10-15 минут). Жидкость Карнуа является прекрасным фиксатором, в особенности для изучения тонкого строения бактерий. Жидкость Карнуа нельзя применять для фиксации мазков крови и отпечатков внутренних органов, так как она вызывает полный гемолиз эритроцитов.
Существует два метода химической фиксации мазков:
Предметное стекло с высушенным мазком погружают в банку с фиксатором, высушивают на воздухе и микроскопируют.
На горизонтально установленные предметные стекла с мазками наносят по капле фиксатор и дают высохнуть.
Время фиксации зависит от применяемых в качестве фиксаторов веществ.
Приложение 7
ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ ОКРАСКА БАКТЕРИЙ ПРОСТЫМИ МЕТОДАМИ
Окраска выявляет морфологию и частично структуру клетки.
Для простой окраски используют только один краситель, чаще всего красного цвета – раствор фуксина (окраска 10 – 30 сек), фиолетового – генцианвиолет (окраска производится в течение 1 – 2 мин) или синего – метиленовый синий (окраска в течение 3 – 5 мин), далее препараты промывают водой и высушивают на воздухе.
При окраске мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, предложенной Синевым А.И. Для этого на высушенный и фиксированный препарат кладут красящую бумагу размером 2х4 см и наносят несколько капель воды. Продолжительность окрашивания мазка определяется методом окраски. По окончании окраски бумагу снимают пинцетом, мазок промывают водопроводной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют.
Приложение 8
МИКРОСКОПИЯ ПРЕПАРАТА С ИММЕРСИОННЫМ ОБЪЕКТИВОМ
Иммерсионный объектив даёт увеличение х90 при условии отсутствия рассеивания потока лучей в связи с неоднородностью среды при их прохождении. В этой связи, во избежание такого дефекта применяется иммерсионное кедровое масло или его заменитель - вазелиновое масло. Процесс микроскопии с иммерсионным объективом х90 ведут с окулярами х7, х10, но чаще с первым из них.
Переносить микроскоп необходимо двумя руками: одной держать штатив, другой – основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкосновения с сильнодействующими веществами типа кислот, щелочей.
Техника микроскопии состоит из нескольких этапов:
1. На готовый окрашенный мазок наносят каплю масла.
2. Под контролем глаза сбоку осторожно опускают тубус, погружая объектив в каплю масла. При неосторожном выполнении можно раздавить либо линзу объектива, либо предметное стекло.
3. После прикосновения объектива к маслу дальнейшее опускание тубуса ведётся с помощью микровинта микроскопа до появления микрообъектов в окуляре.
4. Просмотр препарата ведут только за счёт манипуляций с микровинтом и движения стекла.
5. После окончания микроскопии тубус поднимают, объектив выходит из капли масла.
6. Масло с объектива удаляют чистой марлей и протирают жирорастворителем - либо ксилолом, либо спиртом, либо хлороформом. Оставлять масло на линзе объектива нельзя.
7. Револьверную часть на тубусе устанавливают на объектив х8, конденсор и тубус опускают, переводя в нерабочее состояние, и закрывают микроскоп колпаком.

Приложенные файлы

  • docx 484908
    Размер файла: 64 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий